İnsan Rekombinant Nano-Antikor Yapılarından Kanser Tanısı ve Tedavisine Yönelik Etken Madde Geliştirilmesi

Authors : Nurşah ERSEZEN, Bertan Koray BALCIOĞLU, Aylin ÖZDEMİR BAHADIR, Melis DENİZCİ, Hasan Ümit ÖZTÜRK, Müge SERHATLI, Filiz KAYA, Hilal YAZICI, Berrin ERDAĞ

Pages : 115-125

View : 17 | Download : 10

Publication Date : 2020-11-01

Article Type : Research Paper

Abstract :Bu çalışmada faj gösterim teknolojisi ile yüksek çeşitliliğe sahip naiv insan ağır zincir değişken bölge insert ignore into journalissuearticles values(VH); nano-antikor kütüphanesi oluşturulması ve buradan Epidermal Büyüme Faktörü Reseptörü`ne insert ignore into journalissuearticles values(EGFR); spesifik yapıların seçiliminin gerçekleştirilerek kanser tanı ve tedavisinde kullanılabilecek aday moleküllerin geliştirilmesi amaçlanmıştır. Bu amaçla, sağlıklı insan periferal kanından izole edilen total RNA`dan cDNA sentezi yapılıp, bu kalıp üzerinden insan VH antikor genlerine spesifik primerler kullanılarak VH antikor genleri PZR yöntemiyle çoğaltılmıştır. Antikor kütüphanesi fajmid vektöre klonlandıktan sonra Escherichia coli insert ignore into journalissuearticles values(E. coli); amber supresör TG1 bakterilerine transforme edilmiştir. Enfektif fajların oluşumu sağlandıktan sonra faj eldesi yapılıp EGFR’ye afinite gösteren yapılar biyopanning döngüleri ile seçilmiştir.3 biyopanning döngüsü sonrasında rastlantısal olarak seçilen 60 farklı klonun antikor geni içerip içermediği PZR ile kontrol edilmiştir. Antikor geni tespit edilen 34 adet klonun EGFR’ye bağlanma afiniteleri faj-ELISA yöntemiyle değerlendirilmiştir. Değerlendirilen klonlardan 6 tanesinin EGFR`ye bağlanma afinitelerinin negatif kontrol olan BSA proteinine kıyasla 2 kattan fazla olduğu; 1 klonun ise 1.8 kat fazla olduğu görülmüştür. İleriki çalışmalarda burada belirlenen klonların karakterizasyonlarına devam edilmesi ve nano-antikor yapılarının üretimlerinin gerçekleştirilmesi planlanmaktadır.
Keywords : Monoklonal Antikorlar, Nano Antikorlar, Faj Gösterim Teknolojisi, Epidermal Büyüme Faktörü Reseptörü