Trizol RNA Ekstraksiyon Metodu: İnek Plasentomu İçin Oldukça Etkili Metod Değerlendirmesi

Authors : Gözde R.ÖZALP, Gözde ŞİMŞEK, Sevim AKÇAĞLAR, Sima SHENAVAİ

Pages : 1-6

View : 15 | Download : 6

Publication Date : 2010-06-01

Article Type : Research Paper

Abstract :Trizol gibi asit guanidium fenol kimyasalları, birçok numuneden yüksek-kalite total RNA izolasyonu için olanak sağlar. İnek plasentomundan insert ignore into journalissuearticles values(total, maternal ve fetal); ekonomik ve tekrar edilebilir bir metotla, yüksekkalite RNA izolasyonu yapabilmek için, total RNA 1 ml guanidin tiyosiyanat içeren asit solüsyonu, sodyum asetat, fenol ve kloroform ile santrifüj edilmiştir. Total RNA isopropanol ile çöktürülmüş ve hiçbir saflaştırma kiti kullanılmamıştır. İzolasyonlar iki farklı protokole göre yapılmıştır. İsopropanol fazına kadar çalışma insert ignore into journalissuearticles values(a); oda ısısında insert ignore into journalissuearticles values(20-22°C); ve insert ignore into journalissuearticles values(b); buz üzerinde insert ignore into journalissuearticles values(0-4°C); yapılmıştır. RNA kalitesi spektrofotometrik olarak, optik dansite insert ignore into journalissuearticles values(OD); ölçümü ile yapılmıştır insert ignore into journalissuearticles values(OD260 nm/OD280 nm > 1.7);. RNA bütünlüğü agaroz jel elektroforezi ile kontrol edilmiştir. Elektroforezis sonuçlarına göre insert ignore into journalissuearticles values(a); protokolüne göre 28s, 18s ve 5s rRNA bantlar gözlenirken, insert ignore into journalissuearticles values(b); protokolüne göre çoğu zaman degrade RNA bantları gözlenmiştir. Total RNA konsantrasyonu insert ignore into journalissuearticles values(b); protokolüne göre belirgin ölçüde yüksek bulunurken, insert ignore into journalissuearticles values(a); protokolüne göre saflığı ve bütünlüğü çok iyi kaliteli RNA elde edilmiştir. Elde edilen total RNA’dan cDNA dönüşümü yapılarak PCR yapılmıştır. RT-PCR ürünleri insert ignore into journalissuearticles values(a); protokolüne göre izole edilen RNA’dan başarıyla elde edilmiştir. insert ignore into journalissuearticles values(a); protokolü, inek plasentomunun total, maternal ve fetal dokularından, hiçbir saflaştırma kiti kullanmadan, yüksek-kalite RNA izolasyonu için ekonomik ve tekrar edilebilir bir metod olduğunu göstermektedir
Keywords : Plasentom, inek, Trizol, RNA