Gıda Tatlandırıcıları Glikasyon Ürünleri Uyarımlı Amiloid Oluşumu Üzerine Fosfodiesteraz 1B Geni Ekspresyon Seviyelerinin Araştırılması

Authors : Altuğ KÜÇÜKGÜL, Aykut KÜTÜKOĞLU

Pages : 80-87

View : 14 | Download : 5

Publication Date : 2019-05-29

Article Type : Research Paper

Abstract :Araştırmada yüksek früktoz diyeti tüketimine bağlı hücrede ortaya çıkan metabolik son ürün metilgliyoksalin in vitro beta amiloid  oluşumu, ikincil haberci molekül siklik adenozin monofosfat (cAMP) ve bu molekülün parçalanmasını sağlayan fosfodiesteraz 1 (PDE1)  üzerine etkilerinin araştırılması amaçlandı. Çalışmada insan orijinli glioblastoma U-87 MG (ATCC HTB-14) hücre hattı kullanıldı. Hücreler,  içeriğinde %10 oranında fötal sığır serumu (FBS) ve penisilin/ streptomisin/amfoterisin B karışımı bulunduran Eagle’s Minimum Essential  Medium (E-MEM) besi ortamında, 37°C, %5 CO2 ve %95 hava bulunduran steril inkübatörde üretildi. Çalışmada 1 gün önceden 24  kuyucuklu besi kaplarına ekilen hücrelere farklı konsantrasyonlarda metilgliyoksal (100- 400 um) eklendi. Süre sonunda kuyucuklara  MTT (Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide) ayıracı eklenerek metilgliyoksalin etkin konsantrasyonu tespit edildi. Sonraki denemelerde bu  konsantrasyon hücrelere uygulanarak 24 saatin sonunda alınan RNA örneklerinden PDE 1B, PDE 1B1 ve Aβ1-40 gen ekspreyon düzeyleri  real time PCR metoduyla araştırıldı. Yine alınan protein örneklerinden cAMP düzeyi ise ELİSA metoduyla analiz edildi. Araştırmada  yapılan canlılık kontrollerinde metilgliyoksalin 200 uM konsantrasyonu kontrol grubuna göre hücreleri %28 oranında azalttığı gözlendi.  Bu konsantrasyon etkin konsantrasyon olarak kabul edilerek sonraki çalışmalar için kullanıldı. Yine metilglyoksalin hücreiçi cAMP  düzeyini %31 oranında arttırdığı tespit edildi. Elde edilen gen ekspresyon verilerine göre metilgliyoksal Aβ1-40 gen ekspresyonunu  3.7 kat arttırıken, sırasıyla PDE1B ve PDE1B1 gen ekspresyonlarını ise 1.6 ve 3.3 kat baskıladığı ettiği tespit edildi. Yapılan araştırmada  fruktoz diyetinin etkilenen bireylerde Alzheimer hastalığının patogenezinde anlamlı derecede etkileyeceği kanısına varıldı. Ancak  konunun tam aydınlatılması için başta in vivo denemeler olmak üzere ve daha ileri araştırmalara ihtiyaç duyulmaktadır.
Keywords : Alzheimer, cAMP, Amiloid protein, Fosfodiesteraz