Cloning of the Ssap-NtrB prokaryotic gene into the eukaryotic expression vector pcDNA3.1 / V5 / His B vector

Authors : Nelin HACIOĞLU, Feray KÖÇKAR

Pages : 547-554

Doi:10.25092/baunfbed.718256

View : 8 | Download : 9

Publication Date : 2020-04-10

Article Type : Research Paper

Abstract :İntihar gen terapisi son zamanlarda kanser tedavilerinde kullanılan bir yöntem olarak karşımıza çıkmaktadır Bu terapilerde hücrede ifade olan enzimlerden faydalanılmaktadır. Bu çalışma kapsamında, Staphylococcus saprophyticus supsp. saprophyticus’tan elde edilen Ssap-NtrB geninin ökaryotik ekspresyon vektörü olan pCDNA3.1 / V5 / His B’ye klonlanması gerçekleştirilmiştir. Bu amaçla, ilk olarak genin içinde bulunduğu pET14B vektöründen restriksiyon kesimleri ile gen bölgesi alınarak, pGEM-T-Easy vektörüne aktarılmıştır. Bu adımdan sonra seçilen uygun enzimler olan KpnI/ApaI ile kesim yapılarak hazırlanmış olan pCDNA3.1 / V5 / His B’ye ligasyonu sağlanmıştır. Kontrol kesimleri ile gen klonlamanın doğrulanması sağlanmıştır. Sonuç olarak, intihar gen tedavisinde kullanıma hazır hale getirilen Ssap-NtrB geninin klonlanması ve kontrolü gerçekleştirilmiştir. Bu sayede ökaryotik kanser hücrelerinde kullanıma hazır hale getirilmiştir.
Keywords : Ssap NtrB, nitroredüktaz, ekspresyon vektörü, pcDNA3 1 HisB