One step modification of Chlamydomonas reinhardtii BACs using the RED/ET system

Authors : Münevver AKSOY, Charlene FOREST

Pages : 49-55

Doi:10.29136/mediterranean.508032

View : 11 | Download : 6

Publication Date : 2019-04-01

Article Type : Research Paper

Abstract :Tüm genom sekansının tamamlanması üzerine, Chlamydomonas BAC’ları fonksiyonel genomik analizlerinde yaygın bir şekilde kullanılmaktadır. Fakat bu vektörlerin hazırlanmalarında kullanılan aşağıdaki sebeplerden dolayı bu tip analizlerde kullanımları optimalden daha düşük olmaktadır: insert ignore into journalissuearticles values(1); Bu BAC’larda komplementasyon analizlerinde elde edilen transformantların direk seçimini sağlayan bir gen yoktur. insert ignore into journalissuearticles values(2); BAC ve bağımsız bir vektörün ko-transformasyon insert ignore into journalissuearticles values(birlikte transformasyon); olarak kullanımında birlikte transformasyon oranı düşüktür. insert ignore into journalissuearticles values(3); BAC’ların çoğu birden fazla gen içermektedir, bu da her genin farklı bir vektöre sub-klon insert ignore into journalissuearticles values(alt klonlama); yapılmasını gerektirmektedir insert ignore into journalissuearticles values(bu da restriksiyon enzimlerine bağımlılık demektir);. Bu çalışmada, BAC transformasyonu işlemini kolaylaştırmak için, RED/ET tekniğini kullanarak Chlamydomonas BAC’larına 2 selectable marker cassette insert ignore into journalissuearticles values(seçilebilir ekspresyon kaseti); eklenmiştir. Bir ökaryotik ve bir prokaryotic ekpresyon kaseti ligasyon edilmiş ve BAC’ların iki basamak modifikasyonu yerine, tek basamakta modifiye edilmesi sağlanmıştır ve bu kasetlerin ekspresyonu kanıtlanmıştır. Böylelikle BAC’ların Chlamydomonas ’da fonksiyonel genomik analizlerinde kullanımları için harcanacak zaman süresi azalacaktır.
Keywords : Chlamydomonas reinhardtii, BAC rekombinasyonu, Fonksiyonel genomik, Komplementasyon