Solanum lycopersicum Ekspanzin (LeExp1) Geni İçeren Rekombinant Pichia pastoris Protein Ekspresyon Vektörünün Dizaynı ve Oluşturulması

Authors : Asliye KARAASLAN, Mehmet KARAASLAN, Hasan VARDİN

Pages : 30-36

View : 12 | Download : 8

Publication Date : 2017-06-01

Article Type : Research Paper

Abstract :Bu çalışmanın amacı rekombinant ekspanzin proteini üretim amacıyla kullanılacak olan LeExp1-pPIC9K vektörünün dizayn edilmesi ve oluşturulmasıdır. Bu amaçla domates (Solanum lycopersicum) genomundan toplam RNA izole edilmiş ve spesifik primerler vasıtasıyla RT-PZR yöntemiyle LeExp1 genine ait olan komplementer DNA (cDNA) sentezlenmiş ve çoğaltılmıştır. LeExp1 genine ait cDNA pPIC9K vektörüne aktarılmadan önce EcoRI ve NotI restriksiyon enzimleriyle kesilmiş ve yine bu enzimlerle kesilmiş olan pPIC9K vektörüne DNA ligaz enzimi kullanılarak eklenmiştir. Klonlama işlemi sonrasında hedef geni içeren vektör JM109 kompetent E. coli hücrelerine ısı şoku uygulamasıyla transforme edilmiş ve antibiyotikli besiyerinde seçilim gerçekleştirilmiştir. Antibiyotik pozitif olan tek kolonilerin hedef geni taşıyıp taşımadıkları koloni PZR yöntemiyle doğrulanmış ve E. coli hücrelerinden plazmid DNA’ler ekstrakte edilmiştir. PZR sonuçlarına göre 918 baz çiftlik LeExp1 geninin vektör içerisindeki varlığı tespit edilmiş ve dizi analizleriyle doğru nükleik asit sekansına sahip olduğu belirlenmiştir. Bu çalışmanın sonucunda moleküler analizler kullanılarak rekombinant ekspanzin proteinin üretilebilmesi için gerekli olan vektörün doğru bir şekilde oluşturulduğu ortaya konulmuştur.
Keywords : Ekspanzin, Pichia pastoris, rekombinant protein, pPIC9K