Iğdır İlinin Yerel Üzümü Kırmızı Kişmişi (Vitis vinifera L.) Çeşidinden Polifenol Oksidazın Kısmi Saflaştırılması ve Karakterizasyonu

Authors : Elif Duygu KAYA, Ayşe TÜRKHAN, Sadiye Peral EYDURAN, Melekşen AKIN

Pages : 153-161

Doi:10.21597/jist.423449

View : 17 | Download : 6

Publication Date : 2018-12-30

Article Type : Research Paper

Abstract :Yerel üzüm çeşidi Kırmızı Kişmişi, Türkiye’nin Iğdır ilinin Necefali köyünden toplandı ve daha sonra laboratuvara taşındı ve -20 °C’de dondurularak saklandı. Kırmızı Kişmişi’den polifenol oksidaz aseton çöktürmesi yöntemi kullanılarak 5.45 kat kısmi olarak saflaştırıldı ve karakterize edildi. 50 gr Kırmızı kişmiş üzümü hücre zarlarını parçalamak için porselen havanda dövüldü. Dondurulmuş Kırmızı kişmişi üzümü %1 polietilen glikol (PEG) içeren 100 mL 50 mM sodyum asetat tamponuyla (pH 5.0) homojenize edildi. Daha sonra homojenat, 4 katlı tulbentten süzüldü ve elde edilen süzüntü 4°C’de 30 dakika 10 000 rpm’de santrifüjelendi. Santrifüjden sonra elde edilen süpernatant, buz banyosunda süpernatanın hacmine kadar soğuk aseton eklendi ve karışım proteinlerin çökeltilmesi için gece boyunca 4°C’de inkübe edildi. 4°C’de 30 dakika 10 000 rpm’de santrifüj edildikten sonra, çökelti 20 mL 50 mM sodyum asetat tamponu (pH 5.0) içinde yeniden çözündürüldü. Protein konsantrasyonu Lowry yöntemine göre belirlendi. Ham enzim özütü ve aseton çöktürmesi sonrası protein konsantrasyonları sırasıyla 7.04 ve 3.83 mg/mL olarak belirlendi. Katekol substratı kullanılarak, optimum pH ve sıcaklık değerleri sırasıyla 6.0 ve 20°C bulundu. Buna ek olarak, Km ve Vmaks değerleri gibi bazı biyokimyasal özellikler araştırıldı. PFO enzimi için askorbik asit, sitrik asit, sodyum metabisülfit ve benzoik asit ile inhibisyon çalışmaları yapılmış, herbir inhibitör için IC50 hesaplanmıştır. Bu çalışmadan elde edilen veriler, bu enzimin gıda endüstrisi için yararlı olabileceğini gösterdi.
Keywords : Kırmızı kişmişi, kısmi saflaştırma, karakterizasyon, polifenol oksidaz, ïnhibisyon