HT-29 Kolon Kanser Hücre Hattında Senkronizasyon Başlatıcıların Sirkadiyen Ritimdeki Rolü

Authors : Dilek ÖZTÜRK, Beyza GÖNCÜ

Pages : 2207-2215

Doi:10.21597/jist.551238

View : 17 | Download : 6

Publication Date : 2019-12-01

Article Type : Research Paper

Abstract :Memelilerde merkezi sirkadiyen saat, hipotalamusta konumlanmıştır. Periferal saatleri nöronal ve endokrin sinyaller ile koordine etmektedir. Sirkadiyen saat gen ve proteinlerinin, merkezi saatten bağımsız olarak da periferal hücre ve dokularda ritmik ekspresyona devam ettiği yapılan çalışmalar ile gösterilmiştir. İmmortalize hücre hatlarında da ritim devam etmekte ancak hücreler arası koordinasyon bozulmaktadır. Hücre hatları kanser ile ilgili yolaklar ve sirkadiyen ritim ilişkisini çalışmak için en elverişli aracılardır. Ancak öncelikle ritmik gen ekspresyonunun devam ettiğinin gösterilmesi gerekmektedir. Hücreler arası senkronizasyonun sağlanması için bazı aracılar kullanılmaktadır. Bu çalışmadaki amacımız; güçlü senkronizasyon başlatıcılar olan fetal bovin serum ve deksametazonun HT-29 kolon kanseri hücre hattında PER2 saat geninin ekspresyonu üzerindeki rolünü incelemektir. Bu amaçla; fetal bovin serum veya deksametazon uygulamasını takiben HT-29 hücreleri altı farklı zamanda toplanarak RNA izole edilmiş ve PER2 ve ACTB gen ekspresyonları gerçek zamanlı PZR deneyi ile kantifiye edilmiştir. Sonuçlar Lineer Cosinor analizleri ile değerlendirilmiştir. PER2 genine ait mRNA ekspresyonlarındaki değişim ACTB referans geni ile kıyaslanarak değerlendirildiğinde, her iki başlatıcı ile de ritmik ekspresyonun sağlandığı gösterilmiştir. Her iki başlatıcı ile de Cosinor analizine göre 18 ve 24 saatlik periyot sürelerinde anlamlı ritmik değişim gösterilmiştir. Ek olarak deksametazon ile başlatılan senkronizasyonda, 24 saatlik periyot süresinde zaman dilimindeki güven aralığının anlamlı olduğu gözlenmiştir. HT-29 hücre hattında iki farklı başlatıcı ile yapılan bu çalışmada sirkadiyen periyot sürelerinin hesaplanmasında başlatıcıların değişkenlik gösterebildiği tespit edilmiştir.
Keywords : Senkronizasyon, Sirkadiyen ritim, HT 29, FBS, Deksametazon