Purification and Characterization of 6-Phosphogluconate Dehydrogenase from Japanese Quail (Coturnix, coturnix japonica) Erythrocytes

Authors : Hardi RAFAT BAQI, Yusuf TEMEL, Mehmet ÇİFTCİ

Pages : 1180-1190

Doi:10.21597/jist.625729

View : 14 | Download : 6

Publication Date : 2020-06-01

Article Type : Research Paper

Abstract :Bu çalışmada Japon bıldırcın eritrosit dokularından 6-fosfoglukonat dehidrogenaz enzimi (6PGD) 52,84 EU.mg-1 spesifik aktiviteyle ve % 69 verimle 2ˈ, 5ˈ-ADP Sepharose 4B afinite kromatografisi kullanılarak saflaştırıldı. Japon bıldırcın eritrositlerinden saflaştırılan 6PGD enzimi için saflaştırma katsayısı 4984 olarak bulundu. Enzim saflığının kontrolü için SDS-poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) yapıldı ve tek bant gözlendi. SDS-PAGE yöntemi kullanılarak enzimin alt birimlerinin molekül kutlesi 81 kDa olarak hesaplandı. Optimum iyonik şiddet 0,5 M Tris-HCl, optimum pH ve stabil pH 0,5 M Tris-HCl tamponu pH 8,0 olarak bulundu. Optimum sıcaklık 60 ºC olarak bulundu. Ayrica Japon bıldırcın 6PGD enziminin KM ve Vmax değerleri Lineweaver-Burk grafiklerinden sırasıyla 6PGA substratı için KM değeri 0,120 mM, Vmax değeri 0,191 EU/mL, NADP+ substratı için KM değeri 0,017 mM, Vmax değerise 0,228 EU/mL olarak hesaplandı.
Keywords : Bıldırcın, 6PGD, eritrosit, saflaştırma, karakterizasyon