Changes Occurring in the Proteome of SH-SY5Y Cells Caused by Fat Mass and Obesity Associated (FTO) Protein Expression Reveals Multifaceted Properties of the FTO Protein

Authors : Aylin KANLI, Murat KASAP, Gürler AKPINAR, Sevinç YANAR

Pages : 101-112

Doi:10.30934/kusbed.666084

View : 17 | Download : 6

Publication Date : 2020-06-05

Article Type : Research Paper

Abstract :Amaç: Fat mass and obesity associated (FTO) proteini postranskripsiyonel modifikasyonlar, DNA tamiri ve yağ asidi metabolizması gibi çeşitli hücresel işlevlerde rol oynayan bir RNA dematilazdır. Başlangıçta obesite ile yakından ilişkilendirilen FTO proteininin daha sonraki çalışmalarla nörolojik hastalıklar ve çeşitli kanser türleri ile ilişkili olduğu gösterilmiştir. Bu çalışmanın amacı SH-SY5Y hücrelerinde FTO geninin ekzonik R316Q mutasyonunun çözünür proteom üzerindeki etkilerini araştırmaktır. Yöntem: İki boyutlu Difference Gel Electrophoresis (2D-DIGE) deneylerinde, Tet promotörün kontrolü altında yabanıl (WT) veya mutant FTO proteinlerini stabil şekilde eksprese eden SH-SY5Y hücreleri kullanılmıştır. 2-kat regülasyon kriterine göre WT ve mutant FTO proteinini fazla eksprese eden örneklerde 500’den fazla protein spotu karşılaştırılmış ve ekspresyonlarında değişiklik görülen protein-spotları jellerden kesilerek MALDI-TOF/TOF ile tanımlanmıştır. Bulgular: Genel olarak, WT ve mutant FTO ifadesi çözünür proteomda büyük değişikliklere neden olmamıştır. Ancak, altı protein noktasında bazı küçük değişiklikler gözlemledik. Bu protein noktalarının üçü Hsp70'e aitti ve mutant FTO eksprese eden hücrelerde daha fazla eksprese idi. Bu, Hsp70'in yalnızca fazla eksprese olduğunu değil, aynı zamanda translasyon sonrası değişikliğe uğradığını da gösterir. İfadesi regüle edilen diğer proteinler fosfogliserat kinaz-1 (PGK1), kalmodulin ve keratindir. Sonuç: Bu sonuçlar FTO’nun enerji metabolizması ile ilişkisinin yanı sıra hücresel strese cevabı indükleyebileceğinin bir göstergesi olabilir. Ek olarak, FTO Wnt sinyal iletim yolağını etkiyelebilir. Genel olarak, çalışmamız FTO'nun çok yönlü özelliklerini vurgulamış ve nöroblastom hücrelerinin proteomunda meydana gelen değişiklikleri yansıtmıştır.
Keywords : FTO Fat mass and obesity associated proteini, R316Q mutasyonu, FTO ilişkili hastalıklar, SH SY5Y, Proteomiks, 2D DIGE