Dondurma-Çözme İşleminin Ardından Uygulanan Santrifüjün Ortaya Çıkardığı Mekanik Stresin Karaciğer Kanser Hücreleri İn Vitro Kültürü Üzerine Etkileri

Authors : Hatice İSAN, Kübra TÜFEKÇİ, Meltem Elif GÖKLÜ, Ranan Gülhan AKTAŞ

Pages : 1-5

View : 14 | Download : 7

Publication Date : 2016-12-01

Article Type : Research Paper

Abstract :Amaç: Çalışmamızda; dondurma-çözme işleminin ardından direkt kültürü yapılmış ve santrifüj işlemi uygulandıktan sonra kültüre edilmiş HepG2 hücrelerinin in vitro ortamda karşılaştırmalı değerlendirilerek hücre çözme işlemi için en uygun yöntemin belirlenmesi amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: %10 DMSO Dimethylsulfoxide ve %1 FBS Fetal Bovine Serum içeren DMEM Dulbecco's Modified Eagle's Medium den oluşan dondurma medyumu içerisinde dondurulmuş HepG2 hücreleri, 37°C su banyosu içerisinde çözüldükten sonra iki gruba ayrıldı. I. Gruptaki hücreler direkt kültür metodu uygulanarak; II. Grup hücreler ise 3000 rpm de 3 dak. santrifüj edilmelerinin ardından hücre pelleti ayrıştırılarak eşit oranda besi yeri içerisinde kültüre edildi. Tüm örnekler; Zeiss PrimoVert invert mikroskobunda hergün karşılaştırmalı değerlendirildi. Ardından 7. Gün fikse edilerek Hematoksilen-Eozin ve Tripan Mavisi ile boyandı. Bulgular: İki grup hücrenin morfolojik özellikleri arasında belirgin bir farklılık gözlenmedi. Ancak santrifüj uygulanan hücrelerin bulunduğu kültür kaplarında kültürün her döneminde ölü hücre sayısının daha yüksek olduğu dikkati çekti. Sonuçlar: Çalışmamız; karaciğer kanser hücrelerinin morfolojisi üzerinde dondurma-çözme işlemleri sonrasında uygulanan santrifüj işleminin belirgin bir farklılığa yol açmadığını göstermektedir. Ancak santrifüj sonrası yapılan kültürlerde, ölü hücre sayısının daha fazla olduğu gözlemlenmiştir. Özellikle hücre sayısının az olduğu çalışmalarda çözme sonrası direkt kültürün yapılmasının daha uygun olacağı kanaatine varılmıştır.
Keywords : HepG2, dondurma çözme, santrifüj, direkt kültür, dimetilsülfoksit