Kronik Myeloid Lösemi K–562 Hücre Hattında Siklofosfamidin Apoptoza Etkileri

Authors : Ebru DERİCİ, Nurcan Aras ATEŞ, Kansu BÜYÜKAFŞAR, R. Nalâ, n TİFTİK

Pages : 12-18

View : 12 | Download : 4

Publication Date : 2008-06-01

Article Type : Research Paper

Abstract :Türkçe Özet:Amaç: Bu çalışmada, insan kronik myeloid lösemi K–562 hücre hattında, çeşitli kanser türlerinde yaygın olarak kullanılan siklofosfamidin, kaspaz-8 ile ilişkili olarak apoptoz üzerindeki etkilerinin araştırılması amaçlandı. Yöntem: Deneysel gruplarda sitotoksisiteyi göstermek için belirli dozlarda siklofosfamid uygulandı ve tripan mavisi canlılık testi ile analiz edildi. Deney gruplarında 24. ve 48. Saat sonra E.Z.N.A. total RNA kiti ile RNA ve first strand cDNA kiti ile cDNA elde edildi. Kaspaz–8 ve gliseraldehidfosfat dehidrogenaz gen ekspresyonları, Real–Time online Revers Transkriptaz Real–Time PCR yöntemi ile belirlendi. Her grubun geçiş noktası değeri, gliseraldehidfosfat dehidrogenaz ile karşılaştırıldı ve ekspresyonların rölatif oranı saptandı. Erken ve geç apoptotik hücre sayıları Annexin–V FITC kiti ile akım sitometrede gösterildi. Bulgular: K–562 hücre hattında, 24. saatte siklofosfamitin 10-7 M ve 10-6 M gruplarında, kaspaz–8 geni için negatif kontrole göre kıyaslandığında ekspresyon düzeylerinde anlamlı bir artış saptandı. 48. saatte tüm gruplarda artış olmasına karşın, siklofosfamitin 10-6 M grubunda bu artış anlamlı bulunmuştur. Sonuç: Bu çalışma, siklofosfamitin apoptozu indüklediğini göstermektedir.
Keywords : K562 hücre serisi, apoptoz, siklofosfamid, Real Time PCR, flow sitometri